• 望远镜的眼睛有多大?这个参数很关键 2019-03-10
  • 一个地产人非正常死亡的启示:房地产业奇迹不再 ——凤凰网房产上海 2019-03-10
  • 口音让他露马脚 背负3条人命公安部B级逃犯被武汉细心民警揪出 2019-02-27
  • 河曲警方开展遵纪守法、打击赌博违法犯罪宣传活动--黄河新闻网 2019-02-14
  • 石家庄专题片展播--河北频道--人民网 2019-02-14
  • 泛海助学行动获第十二届人民企业社会责任奖年度案例奖 2019-02-12
  • 坚决反对美台任何形式官方往来 2019-02-12
  • 视频:16小时长效持妆 测YSL墨水气垫限量版 2019-02-05
  • 中东部高温降雨齐上阵 长江中下游多省份有暴雨 2019-02-05
  • 2018亚洲CES黑科技:美国巨头展示全新智能手表 2019-01-03
  • 《人民日报》让我爱上了文学(原创首发) 2018-12-04
  • 欢迎来到上海权阳生物科技有限公司官网
    您现在的位置:yy智勇三张牌 > RNAi产品 > siRNA合成 > 普通siRNA合成 >
    产品
    请输入基因编号或名称:
    产品分类:
                                                                                                   普通siRNA合成
    产品简介

    普通的siRNA oligo均由HPLC纯化,100%除去尚未配对的单链,价格便宜,质量上乘。研究者只需用包装盒内的通用缓冲溶液稀释后即可用e转染试剂进行后续实验。

    实验方法

    siRNA 转染  
    A.siRNA转染的方法  
      脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几点
    哺乳动物转染的常见方法有:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法(例如,显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。
    • 转染试剂的用量
    • siRNA的用量 
    • 转染时的细胞密度
    • 转染时的操作顺序 
    • 转染时的操作顺序 
     
    • 细胞与转染试剂/siRNA复合物的温浴的时间
    B.Lipofectamin2000 转染试剂  
      Lipofectamin2000的应用领域
    选择最适合的转染试剂和转染条件,往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。 Lipofectamin2000适用于核酸的体内和体外操作,可应用于DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA的转染,也可应用于DNA/siRNA 的共转染操作;是一种新型的高效siRNA转染试剂。
    • 原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
     
     
    • siRNA高通量转染试验
     
     
     
    • DNA转染;DNA和siRNA的共转染
     
     
     
    • 核酸(siRNA、DNA、RNA)的体内导入试验
     
     
     
    • 贴壁细胞和悬浮细胞转染
       
      Lipofectamin2000 的特点:
      不必更换培养基,操作简便易行,可在半小时内完成操作
      在含血清培养基中也能表现高转染效率
      细胞毒性低;适用细胞广泛
      即用型试剂,可在含有抗生素的完全培养基中转染
      基于脂质的转染试剂,确保没有RNAse活性
      □ 可介导siRNA高转染细胞及体内siRNA的高效导入
    C.Lipofectamin2000适用的细胞类型   
    Lipofectamin2000转染试剂可广泛应用于多种细胞系的DNA和siRNA转染如:

    HeLa(人颈部癌 细胞)、MCF-7(人乳房癌细胞)、Hep3B(人肝细胞癌细胞)、COS-7(猴肾细胞)、Neuro-2a(鼠神经母细胞瘤细胞)、NIKS(人角 质化细胞)、B16(鼠黑素瘤细胞)、DLD-1(人结肠癌细胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、A549(人肺 癌细胞)、CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5 DNA转化的人胚胎肾细胞),SVRbag4细胞等。
           


    D.转染前细胞培养  
      在细胞板上培养细胞时,应使细胞汇合在24小时内达到70-90%。
      细胞培养用品 表面积(mm2/孔) 细胞密度 培养基(μL /孔)  
      96孔板 50 1.5´104-5.0´104 100μL  
      48孔板 100 3.0´104-1.0´105 200μL  
      24孔板 200 8.0´104-2.0´105 500μL  
      12孔板 401 1.6´105-4.0´105 1.0 mL  
      6孔板 962 3.0´105-8.0´105 2.0 mL  
      35 mm 962 3.0´105-8.0´105 2.0 mL  
      60 mm 2827 1.0´106-2.5´106 6.0 mL  
    E.合适的lipofectamin2000用量  
      合适的siRNA(DNA):lipofetamin2000比例对核酸的高效转染有重要影响;我们推荐的 DNA:lipofetamin2000为1:0.5—1:5(ug:ul),siRNA:lipofectamin2000为 1:0.01-1:0.1(pmol:ul)一般情况下,此范围内都可获得高的转染效率。
    细胞培养用品 siRNA/DNA 培养基最终体积 Lipofectamin2000(siRNA/DNA)  
    96孔板 5pmol/0.2μg 100μL 0.25μl/0.5μl  
    24孔板 20pmol/0.8μg 500μL 1μl /2μl  
    12孔板 40 pmol /1.6μg 1 mL 2μl /4μl  
    6孔板 100 pmol /4.0μg 2 mL 5μl /10μl  
    35 mm 100 pmol /4.0μg 2 mL 5μl /10μl  
    60 mm 600 pmol /8.0μg 5 mL 10μl /20μl  
    F.贴壁细胞转染程序     
      转染前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上, 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM(或Opti-MEM,其他培养基)细胞培养基。  
     
      
    选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很 2. 选择用于初期接种的细胞数量,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。  
    重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。  
      在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;  
       
        
      混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μllipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;  
     
      
      将稀释好的siRNA和RNAi-Mate试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。  
     
      
      将100μl siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中,来回轻柔摇晃细胞培养板板。  
     
      
      7. 细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。    
    G.悬浮细胞转染程序     
      转染的当天,收集细胞离心,用含FBS的培养基重悬。  
     
      
      在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清的培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;  
     
      
      混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μl lipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;  
     
      
      将稀释好的siRNA和lipofectamin试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。  
     
      
      再加入400μL细胞悬浮液(细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间)。  
     
      
      6. 细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。    
         
         
         
         
         
    H.DNA和siRNA共转染细胞  
      在转染的前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上,0.5 mL含FBS和抗生素的细胞培养基。
      选择用于初期接种的细胞密度,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
      在100μL的无血清的培养基中稀释20pmol siRNA和0.2μg DNA,加入2μl lipofectamin试剂,充分混合,放置20分钟,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin复合物。
      将siRNA/ DNA/lipofectamin复合物加入培养基中,轻轻混匀。
      5. 细胞在37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它步骤。
    I.siRNA体内导入方法  
      适量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的无菌水中,轻轻混匀,因为注射液体积有限,建议采用高浓度的siRNA或DNA,一般DNA为2μg /μL、siRNA为10μg /μL。
      取适量的DNA、siRNA或siRNA\DNA复合物与lipofectamin混合。例如,在1#管中加入0.5μL的DNA(1μg)和 0.5μL的siRNA(5μg),在2#管中加入0.55μL的lipofectamin(24μg)和0.45μL不含RNA酶的无菌水中,将1#管 中的溶液加入2#管中,在室温下温育30分钟,以形成siRNA/DNA-lipofectamin复合物。
      3. 制备的siRNA/DNA-lipofectamine复合物可用于体内导入siRNA、DNA或siRNA\DNA。

    1.质量保证 2.发货时间 3.关于售后
    Transheep 有一套成熟的质检程序,产品发货前均经过质量检测,确保您收到的产品质量无误! Transheep拥有大量的基因现货产品,本公司的现货产品从订货日期起一周以内即可到货,大大缩短了您的等待时间!另外Transheep的一站式克隆平台也能让您体验到前所未有的快速定制服务! Transheep所售出的产品全部登记在册,如果您拿到我们的产品觉得和实质不相符或存在问题,您只需要告诉我们相关产品信息我们会迅速做出反应,为您提供解决方案或退款!
    4.订购流程 5.联系我们 6.相关服务:
    联系我们→客户或销售人员与您沟通→签订合同→支付预付款→执行项目→确认收货→支付尾款→售后服务 Transheep提供免费的技术咨询,任何关于产品或者技术问题,都可以联系我们们。 免费热线:400-0179890 服务邮箱:yy智勇三张牌 基因合成
    亚克隆构建
    3,UTR验证实验
    启动子合成及验证
    慢病毒包装
    腺病毒包装
    稳转株构建
  • 望远镜的眼睛有多大?这个参数很关键 2019-03-10
  • 一个地产人非正常死亡的启示:房地产业奇迹不再 ——凤凰网房产上海 2019-03-10
  • 口音让他露马脚 背负3条人命公安部B级逃犯被武汉细心民警揪出 2019-02-27
  • 河曲警方开展遵纪守法、打击赌博违法犯罪宣传活动--黄河新闻网 2019-02-14
  • 石家庄专题片展播--河北频道--人民网 2019-02-14
  • 泛海助学行动获第十二届人民企业社会责任奖年度案例奖 2019-02-12
  • 坚决反对美台任何形式官方往来 2019-02-12
  • 视频:16小时长效持妆 测YSL墨水气垫限量版 2019-02-05
  • 中东部高温降雨齐上阵 长江中下游多省份有暴雨 2019-02-05
  • 2018亚洲CES黑科技:美国巨头展示全新智能手表 2019-01-03
  • 《人民日报》让我爱上了文学(原创首发) 2018-12-04